基于土壤宏基因组文库筛选非培养木聚糖酶基因

编号 zgly0000974495

文献类型 期刊论文

文献题名 基于土壤宏基因组文库筛选非培养木聚糖酶基因

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 熊科  高乐  杨玉焕  崔晓亭  李秀婷 

作者单位 食品质量与安全北京实验室  北京市食品添加剂工程技术研究中心  北京市食品风味化学重点实验室 

母体文献 食品与发酵工业 

年卷期 2015(10)

页码 45-51

年份 2015 

关键词 土壤基因组DNA  序列筛选  木聚糖酶  原核表达 

文摘内容 采用物理化学法提取土壤基因组DNA,将土壤DNA纯化后采用序列筛选策略获得非微生物纯培养方式的木聚糖酶基因。序列筛选依据木聚糖酶保守序列设计简并引物,PCR扩增获得200 bp的木聚糖酶核心序列,构建了约5 000个克隆子的序列文库。随机挑取200个克隆子测序,获得11条来自未培养微生物的木聚糖酶核心序列。并对其中细菌源序列1~19进行研究,利用HiTAIL-PCR扩增细菌源序列1~19的木聚糖酶基因全长,分析其编码蛋白,并将其与表达载体pET-28a(+)连接后导入E.coli表达,超声破壁后测得木聚糖酶酶活力为(19.94±0.3)U/mL。