aroA基因的克隆和优化

编号 zgly0000280964

文献类型 期刊论文

文献题名 aroA基因的克隆和优化

作者 何鸣  曾海燕 

作者单位 中山大学生物工程中心//基因工程教育部重点实验室 

母体文献 中山大学学报: 自然科学版 

年卷期 2002,41(2)

页码 76-79

年份 2002 

分类号 Q785  Q943.2 

关键词 5-稀醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸  EPSP合成酶  草甘膦  除草剂  基因克隆  基因优化  转基因作物  aroA基因  酶活力 

文摘内容 除草剂草甘膦(glyphosate,N-phosphonomethylglycine)的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP(5-稀醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸,5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术, 以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合成酶基因为模板, 通过随机结合, 交错延伸的PCR扩增过程, 克服定点突变的局限性, 使基因获得多位点突变, 并使之在大肠杆菌中得到表达。对纯化后的表达产物的酶动力学性质的测定结果表明, 获得了与作为模板的野生型相比, 具有高得多的酶活力(降低的Km(PEP))和大大增强的草甘膦抗性(升高的Ki(glyphosate))的突变基因。