绿色木霉LTR-2 β-1，3-葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

编号 zgly0000560761

文献类型 期刊论文

文献题名 绿色木霉LTR-2 β-1，3-葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作者 高雯  吴远征  杨合同 

作者单位 山东理工大学生命科学学院  山东省科学院中日友好生物技术研究中心 

母体文献 微生物学报 

年卷期 2008,48(2)

页码 239-243

年份 2008 

分类号 Q949.32  S476 

关键词 β-1  3-葡聚糖酶  克隆  序列分析  分泌表达 

文摘内容 根据从GenBank中检索到的木霉菌β-1，3-葡聚糖酶基因序列设计引物，以高产β-1，3-葡聚糖酶菌株——绿色木霉LTR-2的cDNA为模板，采用PCR方法扩增得到内切13-1，3-葡聚糖酶基因(glu)。将glu克隆至载体pMD18-T上，进行了全序列测定。序列分析表明该基因由2289个核苷酸残基组成，含有一个开放阅读框架，可以编码762个氨基酸，与报道基本相同。翻译后的氨基酸序列含有两个β-1，3-葡聚糖酶的保守区RVVYIPPGTY和AASQNKVAYF。基因与已发表的木霉β-1，3-葡聚糖酶基因有较高的同源性，其中和哈茨木霉bgn3-1和绿木霉bgn13．1的同源性达到93％。序列已经提交GenBank，登录号为EF176582。将glu基因插入到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)穿梭载体pPIC9K中，获得重组质粒pGLU14，经线性化后转化毕赤酵母菌株KM71。经大量平板筛选，获得能有效分泌表达β-1，3-葡聚糖酶的毕赤酵母工程菌株KGLU14，菌落PCR扩增证实了glu基因已经整合到酵母基因组中。SDS电泳结果表明其β-1，3-葡聚糖酶的分子量大约为80kDa，和理论推测值大致相同。摇瓶发酵结果表明，培养基中β-1，3-葡聚糖酶的活力可达889U／mL。