口蹄疫病毒O型OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建

编号 zgly0001572122

文献类型 期刊论文

文献题名 口蹄疫病毒O型OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建

作者 苗书魁  魏玉荣  魏婕  米晓云  汪萍  马文戈  王延  薛英  易忠  黄炯 

作者单位 新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心  天康生物股份有限公司 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2018年01期

年份 2018 

分类号 S852.65 

关键词 口蹄疫病毒  全长cDNA  转染  病毒拯救 

文摘内容 为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)的感染性克隆,采用RT-PCR将O型FMDV OHM/02株全长基因组分为5个重叠的片段进行扩增,克隆至载体pUC57中,获得全长cDNA克隆pPO-1。将线性化的pPO-1与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,出现致细胞病变效应(CPE)。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切、测序,表明人工设计的分子标记Bam HⅠ酶切位点消失,排除了亲本毒株污染的可能性。间接免疫荧光试验可以检测到绿色荧光,电镜观察可观察到病毒粒子,表明构建了具有感染性的OHM/02毒株全长cDNA克隆。病毒生长曲线表明,拯救病毒与亲本病毒的复制能力和增殖特性相似。OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建及拯救可为FMDV致病机理的研究提供一种重要工具,可促进疫苗的研发。