大赖草ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

编号 zgly0001529032

文献类型 期刊论文

文献题名 大赖草ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

作者 代培红  周贵玲  苏秀娟  李月  刘超  吾买尔夏提·塔汉 

作者单位 新疆农业大学农学院  新疆农业大学草业与环境科学学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2016年10期

年份 2016 

分类号 S543.9 

关键词 大赖草  ISSR-PCR  单因子试验  正交设计  引物筛选 

文摘内容 本试验的目的在于建立大赖草最佳的ISSR-PCR反应体系。以大赖草基因组DNA为模板,利用单因子实验相结合正交试验设计的方法,对PCR体系的各因素(d NTPs,DNA及引物等)进行优化试验,同时筛选出扩增条带清晰、稳定性好的ISSR引物并确定其退火温度。试验表明,经优化后的PCR体系:在25μL体系中,DNA用量为50 ng、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、引物的浓度为0.4μmol/L、d NTPs的浓度为0.3 mmol/L、和Mg2+的浓度为2.5 mmol/L。体系验证试验表明该体系稳定、可靠,另外筛选出10条较好的引物,可用于后续的大赖草遗传多样性分析及亲缘关系分析、基因定位与克隆、连锁图谱构建等方面的研究,并对其它近缘作物有指导意义。