枯草杆菌manA基因的克隆及定点突变

编号 zgly0000550145

文献类型 期刊论文

文献题名 枯草杆菌manA基因的克隆及定点突变

作者 毛绍名  章怀云  张学文 

作者单位 中南林业科技大学生命科学与技术学院  湖南农业大学生物科学技术学院 

母体文献 微生物学通报 

年卷期 2007,34(3)

页码 528-532

年份 2007 

分类号 Q93 

关键词 β-甘露聚糖酶  基因克隆  定点突变 

文摘内容 manA是编码β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC3.2.1.78)的基因。将枯草杆菌A33株的manA基因插入到pET-32a载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了异源非融合表达,表达活力为41.58U/mL。为了提高酶的表达活力,当采用PCR介导的定点突变技术将该基因第2号密码子CUU突变为GUU,构建成突变表达载体pET-32a-manA＊并转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,目标酶表达活力增加到138.65U/mL。说明当β-甘露聚糖酶N端第二号氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸后,酶在大肠杆菌中的表达活力大大提高。推测是由于突变后的β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中的稳定性增强所致。突变表达的β-甘露聚糖酶最适作用温度和pH值并没有发生明显改变。