斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定

编号 zgly0001433551

文献类型 期刊论文

文献题名 斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定

作者 左洪亮  陈永  高璐  刘海远  钟国华 

作者单位 华南农业大学昆虫毒理研究室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2012年02期

年份 2012 

分类号 S433.4 

关键词 斜纹夜蛾  铁硫亚基蛋白  原核表达  蛋白功能  SL-1细胞 

文摘内容 铁硫亚基蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递过程中起到重要作用。本研究通过RT-PCR克隆得到斜纹夜蛾Spodoptera litura RISP基因SlitRISP的ORF,构建了pET32a-SlitRISP原核表达载体,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,SlitRISP原核表达蛋白以包涵体的形式存在于菌体沉淀中,且RISP抗体可成功用于该蛋白的免疫印迹检测。为了进一步鉴定SlitRISP在斜纹夜蛾离体细胞系SL-1中的功能,通过向细胞内转染siRNA,利用RNAi技术沉默SL-1中的SlitRISP。qRT-PCR结果表明,分别经50nmol/L和100nmol/L siRNA处理48h后,SL-1中SlitRISP的表达均几乎完全被抑制;Western blot结果显示,SL-1中SlitRISP含量显著低于CK。当SL-1SlitRISP被成功沉默后,通过检测SL-1线粒体膜电位、细胞ATP含量和细胞增殖抑制率鉴定RISP在线粒体电子传递过程中的重要作用。流式细胞仪测定结果表明,经50nmol/L和100nmol/LsiRNA处理24h后,SL-1线粒体膜电位相对于CK分别降低23.52%和11.32%,而处理48h后,SL-1线粒体膜电位则分别升高5.58%和27.66%;siRNA处理24h和48h后,SL-1ATP含量相对于CK分别降低82.71%和84.50%,最终导致SL-1细胞增殖抑制率分别为53.64%和67.94%。这些结果表明SlitRISP在SL-1中参与线粒体膜电位的形成和细胞ATP的合成。介于RISP在线粒体电子传递链中的重要作用,其可能成为新型杀虫作用靶标,这可为研制新型呼吸抑制剂提供参考。