褐色橘蚜全蛋白双向电泳体系条件优化

编号 zgly0001644193

文献类型 期刊论文

文献题名 褐色橘蚜全蛋白双向电泳体系条件优化

作者 刘莹洁  王瑛丽  王琴  杨方云  周彦  周常勇 

作者单位 西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2018年04期

年份 2018 

分类号 S436.66 

关键词 褐色橘蚜  全蛋白提取  双向电泳  条件优化 

文摘内容 为优化有效分离褐色橘蚜Toxoptera citricida全蛋白的双向电泳体系,比较了饱和酚抽提法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)/丙酮沉淀法、直接裂解液法和Tris-HCl法4种蛋白提取方法,以及蛋白上样量、聚焦条件和固相p H梯度(immobilized p H gradient,IPG)胶条对褐色橘蚜全蛋白双向电泳的影响。结果表明,TCA/丙酮沉淀法和直接裂解液法获得的全蛋白浓度分别为4.25、4.03μg/μL,显著高于饱和酚抽提法和Tris-HCl法,且TCA/丙酮沉淀法所提取的蛋白种类丰富度最高。采用TCA/丙酮沉淀法获得全蛋白,当上样量为100μg时,所得蛋白质点多、分辨率高、背景清晰,除盐3 h,等电聚焦量45 000 V·h,并选用p H 3~10非线性IPG胶条时,双向电泳图谱中横向拖尾现象少,蛋白点相对清晰,分布均匀。表明所建立的双向电泳体系,结合银染,可从褐色橘蚜全蛋白中识别出1 264个蛋白点,且重复性研究匹配率高,可用于褐色橘蚜蛋白质组学研究。