体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段

编号 zgly0001400918

文献类型 期刊论文

文献题名 体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段

作者 邹艳丽  赵永刚  张永强  包静月  孙成友  王君玮  李金明  王志亮 

作者单位 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2011年12期

年份 2011 

分类号 S852.659.6 

关键词 西尼罗河热病毒  T7启动子  体外转录 

文摘内容 目的通过体外转录获得西尼罗河热病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计西尼罗河热病毒基因保守区克隆引物,PCR从合成的基因DNA获得相应片段,连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含西尼罗河热病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6ng/μL,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为西尼罗河热病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。