鸡gga-miR-199a慢病毒表达系统的构建

编号 zgly0001750259

文献类型 期刊论文

文献题名 鸡gga-miR-199a慢病毒表达系统的构建

作者 董小琳  任远明  薛剑楠  王方  魏泽辉 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院  陕西省镇坪县畜牧兽医中心 

母体文献 家畜生态学报 

年卷期 2023,44(2)

页码 14-18

年份 2023 

分类号 S831.2 

关键词 鸡  gga-miR-199a  慢病毒  过表达 

文摘内容 为建立一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的系统,将从鸡DF-1细胞扩增到的gga-miR-199a前体序列克隆入pLL3.7慢病毒载体质粒中用以包装慢病毒。同时构建了更换pLL3.7质粒中鼠源U6启动子更换为鸡源及人源U6启动子的pLL3.7慢病毒载体质粒;将其与慢病毒包装辅助质粒共转至HEK293T细胞中,收集浓缩病毒颗粒并侵染细胞并获得过表达gga-miR-199a的单细胞克隆。提取单细胞克隆总RNA进行gga-miR-199a-5P的定量检测。结果表明,经慢病毒侵染后的细胞中鸡gga-miR-199a表达量显著提高,且人源U6启动子的转录效率最高,该研究成功建立了一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的慢病毒系统,说明该系统有利于在鸡活体或原代细胞中开展miRNA功能的研究。