杂花苜蓿SRAP-PCR反应体系的正交优化

编号 zgly0000708875

文献类型 期刊论文

文献题名 杂花苜蓿SRAP-PCR反应体系的正交优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 周良彬  卢欣石  赖黎丽 

作者单位 北京林业大学草业科学系  新疆农业大学草业与环境科学学院 

母体文献 草地学报 

年卷期 2010,18(3)

页码 345-351

年份 2010 

分类号 Q943 

关键词 杂花苜蓿  SRAP  PCR  正交设计  优化 

文摘内容 利用正交设计L16(45)对杂花苜蓿(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,旨在建立一套适用于苜蓿属(MedicagoL.)种质资源的SRAP标记技术体系。结果表明: 各因素对PCR反应结果都有显著影响,由F值可知,dNTP的量对反应结果影响最大,其次是Taq酶的量,模版DNA浓度的影响最小,各因素水平的变化对PCR反应的影响依次为: dNTP〉Taq酶〉Mg2+〉引物〉模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立杂花苜蓿SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为: dNTP 2μL(0.20 mmol.L-1),TaqDNA聚合酶0.3μL(1.50 U),Mg2+3μL(1.50 mmol.L-1),上、下游引物各1μL(0.40μmol.L-1),50 ng模板DNA1μL,10×PCR buffer 2.5μL(不含Mg2+)。这一优化体系的建立,为今后利用SRAP标记技术进行苜蓿属植物遗传图谱构建、遗传多样性分析及种质资源鉴定等研究奠定了技术基础。