大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的原核表达及免疫原性分析

编号 zgly0001423175

文献类型 期刊论文

文献题名 大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的原核表达及免疫原性分析

作者 鲍玉芳  李伍杰  王华俊  石云良  王俊宁  黄维义 

作者单位 广西大学动物科学技术学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2012年06期

年份 2012 

分类号 S852.7 

关键词 大片吸虫  硫氧还蛋白过氧化物酶  基因表达  抗原性 

文摘内容 构建大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Fg.TPx)原核表达质粒,经大肠埃希菌Rosetta表达融合蛋白(Fg.TPx/His)并对其进行纯化和初步鉴定。PCR扩增Fg.TPx的基因片段,亚克隆至pET32a(+)中构建重组表达载体pPET32a-Fg.TPx。IPTG诱导表达,经镍离子亲和层析分离纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。重组质粒经限制性内切酶双酶切和测序分析表明构建成功,表达产物以可溶性和包涵体形式存在,纯度为90%,Wsetern blot证实该蛋白可与抗His单克隆抗体发生特异性结合反应,分子质量为TPx和His分子质量之和,表明是融合蛋白。重组蛋白可以被大片吸虫感染水牛阳性血清特异性识别。免疫家兔产生的抗体效价最高可达1∶4 000。成功构建了p ET32a-Fg.TPx原核表达质粒,重组蛋白得到高浓度表达,具有抗原性,为进一步研究其在大片吸虫病诊断中的应用奠定了基础。