猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因真核分泌型表达载体的构建及其表达

编号 zgly0001373616

文献类型 期刊论文

文献题名 猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因真核分泌型表达载体的构建及其表达

作者 徐彦召  张彦明  何雷  唐青海  代晨  王静  杨小云 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年05期

年份 2009 

分类号 S852.651 

关键词 猪瘟病毒囊膜蛋白  猪脐静脉血管内皮细胞  分泌型真核表达载体  真核表达 

文摘内容 【目的】构建猪瘟病毒囊膜蛋白(E2 protein)基因的真核表达载体,并将其在猪脐静脉血管内皮细胞中进行表达。【方法】采用PCR技术扩增出E2蛋白全长基因(E2qc)序列和去除跨膜基因(E2sh)序列,并将其克隆入真核表达载体pSecTag2(A)中,构建pSecTag-E2qc和pSecTag-E2sh表达载体,分别进行PCR、双酶切及测序鉴定。用脂质体法将阳性克隆瞬时转染猪脐静脉血管内皮细胞,对转染细胞进行RT-PCR检测目的基因的转录情况,同时对转染细胞及细胞上清液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,以检测目的蛋白的表达情况。【结果】成功克隆了E2蛋白基因全长序列1119bp和去除E2蛋白跨膜基因序列999bp的目的基因。构建的表达载体经PCR、双酶切法及测序鉴定均无误。转染后细胞的RT-PCR结果显示,目的基因被成功转录。转染后细胞及细胞上清液的SDS-PAGE和Western-blot结果显示,目的基因被成功表达。【结论】成功构建了猪瘟病毒E2蛋白的真核表达载体,转染猪脐静脉血管内皮细胞后,分泌表达了猪瘟病毒E2重组蛋白。