gutD基因的克隆及植物表达载体的构建

编号 zgly0000512703

文献类型 期刊论文

文献题名 gutD基因的克隆及植物表达载体的构建

学科分类 220.1510;林木育种学

作者 王悦  燕丽萍  夏阳  李阳春  洪春 

作者单位 甘肃农业大学生命科学技术学院  山东省林业科学研究院 

母体文献 山东林业科技 

年卷期 2007,(6)

页码 39-41

年份 2007 

分类号 S722.3 

关键词 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)  克隆  序列分析  PCR及酶切检测 

文摘内容 通过RT—PCR的方法从大肠杆菌K12中扩增出了gutD基因的全长cDNA片段，将其克隆到pMD18 T—vector中，序列分析表明克隆的片段长度为780bp，包含了完整的gutD基因的编码序列，除编码区第61住密码子由CTG变为CGT和第72位密码子CTT变为CCT其它序列与所报道的修正序列一致。以BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶从克隆载体上切取gutD基因，将其连接在相应酶切的中间载体KS上，再以KpnI和BamHI酶切重组子获得具粘性末端的目的片段(gutD)与植物表达载体pCAMBIA2300连接，重组质粒通过双酶切和PCR鉴定正确后，采用直接转化法将pCAMBIA2300-gutD质粒导入根癌农杆菌LBA4404，并用PCR方法进行了鉴定。