家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及表达和亚细胞定位

编号 zgly0001422187

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及表达和亚细胞定位

作者 林立鹏  潘国庆  李田  马成  边茂飞  党晓群  罗洁  邓远洪  周泽扬 

作者单位 西南大学蚕学与系统生物学研究所  重庆师范大学动物生物学重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2012年01期

年份 2012 

分类号 S884.21 

关键词 家蚕微孢子虫  半胱氨酸脱硫酶  基因克隆  表达  亚细胞定位 

文摘内容 半胱氨酸脱硫酶是一类活性依赖于磷酸吡哆醛的酶类,可催化L-半胱氨酸转化为L-丙氨酸和硫烷硫原子,为铁硫簇组装提供硫原子。基于家蚕微孢子虫基因组数据,克隆了家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶(NbNfs)基因。序列结构分析显示NbNfs含有其活性所需的保守氨基酸位点,但不具有线粒体型N端导肽;系统发育分析表明微孢子虫半胱氨酸脱硫酶与真菌线粒体型半胱氨酸脱硫酶聚为一类,属于类群Ⅰ,起源于α-变形细菌;共线性分析表明半胱氨酸脱硫酶基因在不同微孢子虫之间其基因座位保守,具有共线性。构建重组质粒pET30a(+)-NbNfs,并转化到E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达NbNfs融合蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后,将融合蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,Western blotting检测NbNfs在成熟家蚕微孢子虫具有表达。胶体金免疫定位显示NbNfs主要定位于成熟家蚕微孢子虫的细胞质中。研究结果为家蚕微孢子虫铁硫簇组装途径的研究奠定了基础。