以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立

编号 zgly0001376450

文献类型 期刊论文

文献题名 以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立

作者 邓明俊  肖西志  朱来华  辛学谦  郑小龙  王群  张彦明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  山东出入境检验检疫局 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年12期

年份 2010 

分类号 S854.43 

关键词 免疫PCR  H5N1禽流感病毒  金磁微球 

文摘内容 【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。