牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化

编号 zgly0001469521

文献类型 期刊论文

文献题名 牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化

作者 曹丽  高维凡  温永俊 

作者单位 沈阳农业大学  中国农业科学院特产研究所 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 S852.659.5 

关键词 牛副流感病毒3型  NP基因  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 旨在对牛副流感病毒3型(BPIV3)NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白。根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列(JQ063064)设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,以牛胚肾细胞(MDBK)培养的BPIV3NM09株病毒液提取的RNA为模板,扩增获得2段NP基因序列(NP1、NP2),将2个片段克隆到PGEX-6P-1表达载体,构建具GST标签的重组质粒PGEX-NP1、PGEX-NP2,将2种阳性重组质粒分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),优化诱导表达条件进行可溶性分析,并用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定,同时利用亲和层析法将重组蛋白纯化。最终获得大小分别为42.3ku、38.5ku的重组蛋白,其中PGEX-NP1为包涵体表达,PGEX-NP2为可溶性和包涵体2种表达形式,因PGEX-NP2蛋白疏水性强、等电点较高,其蛋白大小比理论值偏大;Western blot结果显示2种重组蛋白都具有良好的反应原性。