伪狂犬病病毒gE基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

编号 zgly0001362311

文献类型 期刊论文

文献题名 伪狂犬病病毒gE基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

作者 王云龙  王国强  李智涛  朱永喜  李玉林 

作者单位 郑州职业技术学院  河南省生物工程技术研究中心 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2009年07期

年份 2009 

分类号 S852.659.1 

关键词 伪狂犬病毒  gE基因  原核表达 

文摘内容 以质粒pBV222/gE为模板,经PCR扩增出750 bp的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因片段,克隆入pET-41b质粒中并转化大肠埃希菌TG1。经PCR、酶切鉴定,筛选出阳性重组质粒pET41b/gE后,转化表达菌Balgold,IPTG诱导,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析检测。以纯化后的目的蛋白作包被原,建立间接gE-ELISA检测方法。结果表明,目的基因在30℃,0.025mmol/LIPTG诱导条件下,可在Balgold中高效表达,目的蛋白大部分以可溶性形式存在,并能被PRV阳性血清所识别,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(800倍)和包被抗原的最佳工作浓度(1 mg/L)。