快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立

编号 zgly0001383289

文献类型 期刊论文

文献题名 快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立

作者 马继红  于海  周艳君  李国新  闫丽萍  张善瑞  王斌  童光志 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S854.43 

关键词 A型流感病毒  TaqMan探针  实时荧光定量RT-PCR 

文摘内容 根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。