中国南瓜内参基因18S rRNA的克隆及其引物开发

编号 zgly0001570333

文献类型 期刊论文

文献题名 中国南瓜内参基因18S rRNA的克隆及其引物开发

作者 朱海生  王彬  陈敏氡  李永平  张前荣  刘建汀  李大忠  吴卫东  温庆放 

作者单位 福建省农业科学院作物研究所  福建省农业科学院蔬菜研究中心  福建省蔬菜工程技术研究中心  福建省种植业技术推广总站 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年03期

年份 2017 

分类号 S642.1 

关键词 中国南瓜  18S rRNA  内参基因  实时荧光定量PCR 

文摘内容 【目的】克隆获得中国南瓜18SrRNA,并设计合适的荧光定量PCR内参,为开展中国南瓜重要功能基因的表达模式和调控机制研究奠定基础。【方法】以中国南瓜‘密本’品种的基因组DNA为模板,通过PCR方法克隆中国南瓜18SrRNA基因序列,再利用Primer Premier软件设计荧光定量PCR引物,对该内参基因在中国南瓜不同组织、生长阶段及非生物胁迫条件下的表达稳定性进行检测。【结果】首次克隆得到中国南瓜18SrRNA基因序列,其长度为1 857bp,GenBank登录号为KM979454,该基因与西瓜、西葫芦等瓜类蔬菜18SrRNA基因同源性大都在90%以上;以中国南瓜内参基因18SrRNA核苷酸全长序列为基础设计1对荧光定量PCR引物,以中国南瓜果肉总RNA逆转录的cDNA第一链为模板进行PCR扩增,该引物扩增的片段大小为132bp,扩增效率高,特异性强;18SrRNA基因在中国南瓜不同组织、生长发育阶段及非生物胁迫条件下均能稳定表达。【结论】克隆获得中国南瓜18SrRNA基因,该基因适合在中国南瓜基因表达研究中作为内参基因。