松材线虫PCR标准化阳性对照构建及检测体系的建立

编号 zgly0000591997

文献类型 期刊论文

文献题名 松材线虫PCR标准化阳性对照构建及检测体系的建立

学科分类 220.30;森林保护学

作者 刘裕兰  王中康  曹月青  夏玉先  殷幼平 

作者单位 重庆大学生物工程学院／重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心／重庆市高校基因功能与调控重点实验室 

母体文献 应用与环境生物学报 

年卷期 2008,14(1)

页码 122-125

年份 2008 

分类号 S763.712.4 

关键词 松材线虫  阳性对照  PCR检测  引物 

文摘内容 建立了松材线虫PCR检测标准化阳性对照及特异性强的PCR检测体系．根据松材线虫rDNA—ITS区和BxPel2基因的特异基因序列设计引物，并从中筛选出一对特异引物cqubs01／cquba01，该引物能从松材线虫特异性扩增出196bp片段，而不能对其他种类线虫进行扩增．基于优化PCR反应体系和反应程序，稳定的检测体系得以建立，检测灵敏度为100pg／μL．以松材线虫基因组DNA为模板，以上述特异引物进行PCR扩增，将纯化后的PCR产物与PMD18-T载体连接之后转入大肠杆菌中，筛选出阳性克隆进行测序验证，最终获得了松材线虫的无害化阳性对照，建立了松材线虫标准化阳性对照的PCR检测体系．对来自于不同地区的12批次近100个样品进行了实际检测验证，其结果与实际发生情况一致，说明本检测体系稳定可靠．图3表2参8。