人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

编号 zgly0000497323

文献类型 期刊论文

文献题名 人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

作者 胡慧中  柏佳宁  张静  何宏轩  段明星 

作者单位 清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室  河北师范大学生命科学院  中国科学院动物研究所国家野生动物疫病研究中心 

母体文献 中国生物制品学杂志 

年卷期 2007,20(1)

页码 22-24,28

年份 2007 

分类号 Q786 

关键词 热休克蛋白  基因克隆  原核表达 

文摘内容 目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因, 构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中, 转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆, 提取质粒pE28b70F, 转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70, 表达量约占细菌总蛋白的22.3%, 其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Western blot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni^2+-NTA亲和柱, 从1L诱导产物中纯化出约15～20mg重组蛋白, 纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70, 为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。