南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE—L的cDNA文库构建及品质检测

编号 zgly0000477490

文献类型 期刊论文

文献题名 南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE—L的cDNA文库构建及品质检测

作者 王能飞  沈继红  金治平  赵爱云  林学政 

作者单位 国家海洋局第一海洋研究所  国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室  青岛市天然产物研究开发实验室  清华大学生物系  青岛大学天然色素研究所 

母体文献 海洋科学进展 

年卷期 2006,24(4)

页码 520-525

年份 2006 

分类号 Q949.2 

关键词 PCR  南极冰藻  Ribosomal  protein  S5  cDNA文库 

文摘内容 为构建南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L的cDNA文库, 提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA, 以此为模板, 通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA; 再以第一链cDNA产物为模板, 用LD-PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离转入大肠杆菌中, 即获得南极冰藻IcBL的cDNA原始文库, 其滴度为1.6×10^6 cfu/mL。扩增后的cDNA文库的滴度为1.0×10^10 cfu/mL。用PCR方法测得文库的重组率大干97%, 插入cDNA的长度为0.5～1.8kb, 0.9kb以上插入片段占50%以上。取适量扩增文库稀释并铺平板, 挑取72个独立菌落, 对其中22个独立菌落所插入的cDNA进行测序, 克隆到了一个具有5’和3’非编码区的40S ribosomal protein S5全长基因序列, GenBank收录号为AM167929。