利用内标为基础的苹果锈果类病毒RT-PCR检测技术

编号 zgly0001536367

文献类型 期刊论文

文献题名 利用内标为基础的苹果锈果类病毒RT-PCR检测技术

作者 吕运霞  李楠  王亚迪  王雪静  杨金凤  胡同乐  王树桐  王亚南  曹克强 

作者单位 河北农业大学植物保护学院 

母体文献 河北林果研究 

年卷期 2017年01期

年份 2017 

分类号 S436.611.1 

关键词 苹果锈果类病毒  RT-PCR  nad5  分布部位 

文摘内容 为开发准确、灵敏的苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)RT-PCR检测方法,以田间染病苹果组织为试材,提取高质量总RNA为模板,在常规RT-PCR检测体系中引入苹果线粒体nad5基因作为内标基因,对RT-PCR反应体系和程序进行优化,并测定其灵敏度和稳定性,最后利用优化的检测体系确定苹果果实着色期最佳检测部位。结果表明:以RNA提取改良法提取总RNA为模板合成cDNA后,进行PCR扩增,优化后的PCR体系(25μL)中cDNA模板2μL、ASSVd(20pmol/μL)正反向引物各1.0μL,nad5(20pmol/μL)正反向引物各0.1μL;扩增程序中退火温度为60.9℃,循环次数为35次;检测灵敏度为37.5ng新鲜样本;果实着色期,染病植株的幼嫩叶片、1a生枝的韧皮部和木质部、果实及部分种子样本均能检测到病毒,最佳检测部位为幼嫩韧皮部。研究结果可以为ASSVd高效、快速、准确的检测提供可靠方法,并为田间病害诊断及无毒苗木繁育提供依据和借鉴。