对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1 Aa基因的分离克隆及表达

编号 zgly0001272387

文献类型 期刊论文

文献题名 对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1 Aa基因的分离克隆及表达

作者 姚江  张杰  陈中义  宋福平  李长友  胡玉琴  黄大昉 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所  中国农业科学院生物技术研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室  北京100094  植物病虫害生物学国家重点实验室  北京100081 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2003年02期

年份 2003 

分类号 S476 

关键词 苏云金芽孢杆菌  Ly30菌株  cry1 Aa基因  克隆  表达  杀虫活性 

文摘内容 Bt菌Ly30株是我国自行分离的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌 ,经CAPS (cleavedamplifiedpolymorphicse quences)系统鉴定 ,它含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法 ,设计一对特异引物 ,分别引入NcoⅠ和BamHⅠ NcoⅠ酶切位点。以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因 ,与表达载体pKK2 33 2相应酶切产物连接 ,转化大肠杆菌 ,获得含有cry1Aa基因重组质粒pKKLy1Aa。完成了该基因的亚克隆和序列测定 ,结果表明 ,该基因的编码区为 3 5 31bp ,编码蛋白分子量为 133 2kD ,含 1176个氨基酸 ,等电点pI为 4 99。该基因序列已在GenBank中登记注册 ,登录号为AF3842 11,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa12。对重组菌KKLy1Aa进行诱导表达研究。在 0 6mmol LIPTG、 37℃、 8h培养条件下 ,该基因获得高效表达 ,SDS PAGE电泳检测到明显的 133 2kD蛋白带。室内生测结果表明 ,Cry1Aa蛋白对不同的小菜蛾品系均有较高的杀虫活性 ,其LC50 值分别为 0 2 0 3μg mL和 0 5 5 4μg mL。