小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

编号 zgly0000702284

文献类型 期刊论文

文献题名 小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 杨根岭  张晋平  徐倩  谭冬梅  赖国旗  谭毅 

作者单位 重庆医科大学实验动物中心 

母体文献 重庆医科大学学报 

年卷期 2010,35(2)

页码 165-168

年份 2010 

分类号 Q953.5 

关键词 Mouse  killer基因  RNA干扰  重组腺病毒 

文摘内容 目的: 构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的死亡受体(Mouse killer, MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA, siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用。方法: 人工合成靶向MK的siRNA干扰序列, 将其克隆到穿梭载体pSES—HUS上, 并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组, 得到pAdeasy—SES—HUS—MKsiRNA, 在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒。用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞, RT—PCR及Westem Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平。结果: Adeasv—SES—HUS—MKsiRNA混合液均效价为6.8×10^11pfu/ml, 感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后, MK的mRNA及蛋白水平均显著下调。结论: 构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达, 为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具。