美国白蛾hcapn3基因的克隆及HcAPN3蛋白与Cry1Ac结合特性分析

编号 zgly0001525488

文献类型 期刊论文

文献题名 美国白蛾hcapn3基因的克隆及HcAPN3蛋白与Cry1Ac结合特性分析

作者 王翠苹  赵丹  李少雅  郭家萍  郭巍  陆秀君 

作者单位 河北农业大学植物保护学院河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心  北京农学院植物科学技术学院 

母体文献 植物保护 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S433.4 

关键词 美国白蛾  氨肽酶N  HcAPN3  Gluzincin结构域  Ligand Blot分析 

文摘内容 通过比对分析已知昆虫氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)氨基酸序列并结合本实验室的美国白蛾(Hyphantria cunea)中肠iTRAQ结果,设计了hcapn3基因特异引物,获得hcapn3基因片段。通过RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因(hcapn3)全长序列(GenBank登录号为KJ013598)。Blastp分析表明,获得的氨肽酶属于氨肽酶N3家族,命名为HcAPN3。序列分析显示HcAPN3包括952个氨基酸残基,具有典型的谷氨酸锌化氨肽酶(Gluzincin)结构域和羧基端(ERAP1_C)结构域。利用Bac to Bac表达系统在昆虫细胞中表达108kDa的HcAPN3蛋白。在原核表达系统中表达58kDa的Gluzincin结构域和49kDa ERAP1_C的结构域蛋白。Ligand Blot分析结果显示,HcAPN3蛋白及Gluzincin结构域可与Cry1Ac蛋白特异性结合,但ERAP1_C结构域未能与Cry1Ac结合。本研究首次克隆了美国白蛾氨肽酶基因并分析了HcAPN3与Cry1Ac的结合特性,为下一步功能研究提供基础。