甘菊DFL: : EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

编号 zgly0000651722

文献类型 期刊论文

文献题名 甘菊DFL: : EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王翊  付建新  戴思兰 

作者单位 北京林业大学园林学院 

母体文献 生物技术通报 

年卷期 2010(2)

页码 102-108

年份 2010 

分类号 Q78 S855.3 

关键词 小片段克隆  粘性末端PCR  表达载体构建  LFY启动子  DFL:  :  EGFP融合蛋白 

文摘内容 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)是一种优化的突变型GFP, DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式, 研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5’端启始密码子前面, 在pBI121载体的CaMV35S启动子的3’端后面插入一段多克隆位点, 成功地构建了pBI-DFL—EGFP表达载体。通过设计特异引物, 利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列, 用粘性末端PCR技术将pBI—DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子, 构建成了pLFY-DFL—EGFP表达载体。用含有pBI—DFL-EGFP和pLFY—DFL—EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞, 在荧光显微镜下分别用蓝光激发, 均观测到了荧光。这一结果表明, 融合蛋白DFL: : EGFP表达载体构建成功, 同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能。