磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析

编号 zgly0001423461

文献类型 期刊论文

文献题名 磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析

作者 曾艳波  黄兵  董辉  姜连连  赵其平  朱顺海  马卫娇  程军  李婷  孔春林  韩红玉 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2012年03期

年份 2012 

分类号 S859.795 

关键词 磺胺氯吡嗪  弓形虫  速殖子  抑制性消减杂交 

文摘内容 为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库。将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10 000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子。用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2 h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析。结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经Rsa I酶切反应较完全;从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200～750 bp之间,文库的重组率达93%以上;随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高。结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础。