一种基于无缝克隆构建重组杆状病毒的方法

编号 zgly0001541050

文献类型 期刊论文

文献题名 一种基于无缝克隆构建重组杆状病毒的方法

作者 钱月忠  郝雪敏  史翠萍  陈琴  何玉龙  陈健 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2017年02期

年份 2017 

分类号 Q939.4 

关键词 无缝克隆  线性化  重组杆状病毒  复制缺陷  重组拯救 

文摘内容 一些病毒复制过程涉及到断裂双链DNA的修复,主要有同源重组和非同源的末端连接2种修复形式。基于这种修复机制建立了构建重组杆状病毒的无缝克隆方法,采用该方法构建重组病毒的2个主要元件是:线性化的复制缺陷型杆状病毒载体和重组拯救DNA片段。杆状病毒载体经Bsu36Ⅰ酶切后产生2个末端,即切短了的orf1629 3’末端和细菌人工染色体(BAC)末端。其中,含克隆目的基因的重组拯救DNA片段通过同源臂同源重组修复病毒载体orf1629缺失的3’端序列,并通过细胞内的非同源末端连接修复细菌人工染色体片段(BAC)Kanr末端,从而使载体环化产生重组杆状病毒。应用该方法构建重组杆状病毒无需构建重组载体,无需进行重组后筛选,具有成本低、效率高的特点。