农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建及miRn51与其靶基因的表达分析

编号 zgly0001486648

文献类型 期刊论文

文献题名 农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建及miRn51与其靶基因的表达分析

作者 张大燕  贾凌  向仲怀  何宁佳 

作者单位 家蚕基因组生物学国家重点实验室  西南大学蚕学与系统生物学研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2015年01期

年份 2015 

分类号 Q943.2 

关键词 桑树  根瘤农杆菌  瞬时表达  微小RNA  靶基因 

文摘内容 微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码的单链小RNA,对植物的生长发育起着重要调控作用。建立高效的桑树瞬时表达体系是研究桑树miRNA及其靶基因功能的有效手段。将川桑(Morus notabilis)基因组中克隆的miRn51前体序列连接到PLGNL载体上,构建了PLGNL-35S-miRn51重组质粒,通过农杆菌介导其在桑树叶片中瞬时表达。采用GUS组织化学染色、多酚氧化酶活性检测以及荧光定量PCR等方法,分析不同缓冲液、重组农杆菌注射菌液浓度、转化时间、桑树品种等试验条件对农杆菌介导的桑树叶片瞬时表达体系转化效率、miRn51及靶基因表达水平的影响,当采用1号缓冲液和菌液D(600 nm)=0.6的重组农杆菌进行瞬时转化时,转化桑树叶片3 d后miRn51的表达量最高,其靶基因Mn PPO2的表达水平受到明显抑制,不同桑树品种对瞬时表达体系的瞬时表达效率有一定影响。以上结果表明,建立的农杆菌介导的桑树瞬时表达体系能简便、有效、快捷地验证桑树miRNA对其靶基因的调控作用。