白桦ISSR-PCR反应体系的优化

编号 zgly0000389426

文献类型 期刊论文

文献题名 白桦ISSR-PCR反应体系的优化

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 杨传平  潘华  魏志刚  姜静 

作者单位 东北林业大学 

母体文献 东北林业大学学报 

年卷期 2005,33(6)

页码 1-3

年份 2005 

分类号 S791.259 

关键词 白桦  ISSR标记  反应体系 

文摘内容 以白桦基因组DNA为模板, 研究了ISSR的影响因素, 建立一套适宜于白桦的ISSR优化反应体系及程序。即20μL反应体系中, Mg^2+浓度范围为O.5～3.0mmol·L^-1, dNTPs浓度范围为0.10～0.30mmol·L^-1, Taq聚合酶浓度范围为1.0～2.0U, 模板DNA浓度为30～120ng, 同时含有RNA的模板DNA对ISSR扩增也略有影响, 引物浓度范围为0.2～0.4μmmol·L^-1。通过梯度PCR测验, 确定了适宜的退火温度为49℃。反应程序为: 第一个循环基因组DNA经94℃预变性5min; 30个循环为94℃变性30s, 49℃退火30s, 72℃延伸30s; 最后一个循环完成后, 在72℃延伸7min。