荒漠刺叶墙藓DNA的提取及PCR扩增反应条件

编号 zgly0000560868

文献类型 期刊论文

文献题名 荒漠刺叶墙藓DNA的提取及PCR扩增反应条件

作者 王红玲  张元明  吴楠  陈荣毅  聂华丽  张静 

作者单位 中国科学院新疆生态与地理研究所  中国科学院研究生院 

母体文献 干旱区研究 

年卷期 2008,25(1)

页码 98-106

年份 2008 

分类号 Q946 

关键词 刺叶墙藓  DNA提取  ISSR扩增  藓类生物结皮  古尔班通古特沙漠 

文摘内容 采用改进CTAB法、NaOH法和直接PCR法(direct PCR amplification)提取藓类生物结皮中刺叶墙藓(Tortula desertorum Broth．)基因组DNA，比较其分离效果以及ISSR扩增效果。结果表明：改进CTAB法提取的基因组DNA质量好、纯度高，ISSR扩增反应效果好。直接PCR法一旦体系建立，则是最简易快速、经济高效的模板制备方法，适于植株矮小、生物量很小的荒漠藓类植物个体模板DNA的制备。利用改进CTAB法获得的基因组DNA作为模板。对ISSR反应组分浓度及反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化实验，建立了刺叶墙藓最优ISSR反应体系。反应总体积为20μL，各反应组分终浓度为：2μL 10×Buffer，2mM Mg^2＋，0．1mM dNTPs，0．2μM引物，10-40ng模板DNA，1U Taq酶。扩增程序为：94℃ 4min，1个循环；94℃45s，退火温度(Tm)45s，72℃1min，35个循环；72℃7min，1个循环；4℃保存。刺叶墙藓是组成古尔班通古特沙漠藓类生物结皮的优势种，研究结果为进一步开展刺叶墙藓遗传多样性的研究奠定了基础。