H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

编号 zgly0001373783

文献类型 期刊论文

文献题名 H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作者 陈红英  方忠意  崔保安  李新生  夏平安  金钺 

作者单位 河南农业大学牧医工程学院  河南省兽药监察所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年10期

年份 2009 

分类号 S852.65 

关键词 禽流感病毒  河南株  核蛋白  克隆  表达 

文摘内容 【目的】克隆H9N2亚型禽流感病毒(AIV)河南株核蛋白(NP)基因,并将NP主要抗原表位区在大肠杆菌中进行表达,为禽流感基因工程诊断抗原的制备和开发奠定基础。【方法】根据GenBank公布的禽流感病毒NP基因序列设计引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从H9N2亚型AIV河南株感染的鸡胚尿囊液RNA中扩增AIV河南株NP全基因,将扩增的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体并进行测序。通过PCR和酶切方法将NP主要抗原表位区亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达重组蛋白。【结果】测序结果表明,克隆的H9N2亚型AIV河南株NP基因全长为1497bp,包含1个完整读码框,编码498个氨基酸,与GenBank中不同来源、不同亚型的其他7株禽流感病毒NP基因的核苷酸同源性达到95%以上,氨基酸同源性达到98%以上。SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为42 ku的重组蛋白。经1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组蛋白的表达量最高。Western blot分析表明,重组蛋白能够与H9亚型AIV阳性血清发生特异反应。【结论】NP基因非常保守,建立的表达系统能够表达NP蛋白且表达蛋白具有良好的免疫原性。