TaqMan探针实时荧光PCR快速检测苹果牛眼果腐病菌方法的建立

编号 zgly0001514255

文献类型 期刊论文

文献题名 TaqMan探针实时荧光PCR快速检测苹果牛眼果腐病菌方法的建立

作者 林惠娇  王卫芳  易建平  胡学难  何日荣  蒋湘 

作者单位 黄埔出入境检验检疫局  广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室  上海出入境检验检疫局 

母体文献 植物检疫 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S41-30 

关键词 苹果牛眼果腐病菌  Neofabraea属  快速检测  Taqman探针  实时荧光PCR 

文摘内容 苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii)是我国检疫性植物病原真菌,为建立该病菌的实时荧光PCR检测法,根据病菌及其近缘种的翻译延伸因子(EF-1α)的保守序列设计了特异性探针,分别以苹果牛眼果腐病菌菌株和本研究构建的EF-1α重组质粒DNA为阳性标准品检验探针的特异性和灵敏度。结果显示探针MAL-P、PER-P、ALB-P和KIE-P分别对N.malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii表现特异性阳性扩增,而与近缘种及其他常见的果腐病菌无交叉反应,单重探针和4种探针混合液的灵敏度分别达1 fg/μL和10 fg/μL DNA。总计从美国、智利、新西兰、法国进境截获的29批可疑病果的分离物中检测到PCR阳性荧光信号,包括20批N.perennans、8批N.alba和1批N.kienholzii。该方法在6 h内即可完成整个检测流程,其特异性强、灵敏度高,适用于实际样品中苹果牛眼果腐病菌的快速检测。