基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备

编号 zgly0001447943

文献类型 期刊论文

文献题名 基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备

作者 李静芝  曹广力  杨李阳  薛仁宇  黄元姣  贡成良 

作者单位 苏州大学基础医学与生物科学学院  苏州大学现代丝绸国家工程实验室  广西医科大学基础医学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2013年04期

年份 2013 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  基因打靶  绿色荧光蛋白基因  丝素轻链基因  融合表达 

文摘内容 采用基因打靶技术对家蚕丝素蛋白基因(fib)进行分子设计与遗传改造,探讨从基因水平改良蚕丝性能的可行性。以家蚕丝素轻链基因(fib-L)终止密码子TAA上游1.2 kb(fib-LL)和下游0.5 kb(fib-LR)片段作为基因打靶载体的左右同源臂,将绿色荧光蛋白基因(gfp)插入到两同源臂的中间,并使其与fib-L基因处于同一读码框,构建基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R。将该载体质粒转染BmN细胞后,荧光显微镜下观察细胞呈现绿色荧光,表明载体构建成功。将该载体质粒通过精子介导法导入家蚕品种高白的卵,在G0代筛选出茧呈绿色荧光的家蚕,并通过PCR检测证实其为转基因家蚕;用GFP抗体对G3代转基因家蚕幼虫后部丝腺组织进行Western blotting检测,有分子质量为65 kD的Fib-L-GFP融合蛋白特异性条带呈现。转基因家蚕所产蚕丝在蓝光的激发下发出绿色荧光,表明通过基因打靶将gfp导入了家蚕丝素轻链基因中,并成功实现融合表达。