微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

编号 zgly0001423444

文献类型 期刊论文

文献题名 微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

作者 黄燕  米荣升  周鹏  曹薇  杨晓娇  王向佩  王晓娟  石凯  陈兆国 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2012年06期

年份 2012 

分类号 S852.723 

关键词 微小隐孢子虫  P23基因  巴斯德毕赤酵母  真核表达 

文摘内容 为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。