桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶活性分析及其基因CDs区的克隆与表达

编号 zgly0001409664

文献类型 期刊论文

文献题名 桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶活性分析及其基因CDs区的克隆与表达

作者 徐伟佳  韩卫杰  李旺  陈玉林 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院  河南科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 Q786 

关键词 桑天牛  内切β-1  4-葡聚糖酶  内切β-1  4-葡聚糖酶基因  克隆  表达 

文摘内容 【目的】研究陕南地区桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶基因,为构建高效分解纤维素的工程菌奠定基础。【方法】用质量分数为1%的羟甲基纤维素钠(CMC-Na)测定桑天牛幼虫内切β-1,4-葡聚糖酶活性,Trizol法提取桑天牛肠道总mRNA,扩增其内切β-1,4-葡聚糖酶基因,用DNAStar和NCBI上的BLAST进行序列分析。根据测序得到的基因序列设计1对引物,扩增桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶基因CDs区,构建原核表达载体pET-APEG,并在大肠杆菌中表达。【结果】桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶最适pH为4.4~5.6,pH值为5.0时酶活性最高;最适温度为30~50℃,50℃时酶活最高;酶液在37℃稳定性好,而在60℃的水浴中处理30 min,酶活性急剧下降。桑天牛内切β-1,4-葡聚糖酶基因CDs区长度为978 bp,编码325个氨基酸残基;BLAST结果显示,该基因序列与黄星天牛属于GHF5的纤维素酶基因序列相似性达85%,氨基酸序列相似性达90%,与已报道的桑天牛Ag-EaseⅢ的序列相似性达98%,氨基酸序列相似性达99%;构建原核表达载体pET-APEG在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,SDS-PAGE检测结果表明,诱导表达沉淀在约55 ku处有1条特异蛋白条带,与预测蛋白的分子量相符。【结论】陕南地区桑天牛β-1,4-葡聚糖酶为内切葡聚糖酶,属于GHF5家族,其可以在大肠杆菌中表达。