异色瓢虫卵黄蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

编号 zgly0001495712

文献类型 期刊论文

文献题名 异色瓢虫卵黄蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作者 马卓  刘廷辉  陈洁  梁超  曹美琳  何运转 

作者单位 河北农业大学植物保护学院  中国农业大学农学与生物技术学院  邯郸市农业科学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2015年11期

年份 2015 

分类号 S476.2 

关键词 异色瓢虫  卵黄蛋白  单克隆抗体  亚型  亚基鉴定 

文摘内容 【目的】为了能准确地追踪异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)的合成、转运途径和吸收方式,以及卵黄蛋白(vitellin,Vn)在卵母细胞内的积累及分布情况,本研究对异色瓢虫的Vn进行了单克隆抗体(monoclonal antibody,Mc Ab)的制备。【方法】以异色瓢虫Vn免疫BLAB/C小鼠,应用杂交瘤技术,经过3次亚克隆筛选,制备能稳定分泌抗Vn的单克隆抗体。【结果】实验获得4株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,即5E2,5E11,1E9和5H8。其中1E9,5E11和5E2亚型均为Ig G1,5H8亚型为Ig M。Western blot免疫印迹分析显示,4株单克隆抗体可以特异性地识别Vn,而与雄虫血淋巴无反应。其中,5E2和1E9可以与异色瓢虫抗原的4个亚基发生较强的免疫反应,结合腹水制备前上清效价检测结果最终选取5E2制备单克隆抗体。5E2单克隆抗体的效价为1∶81 000,SDS-PAGE分析显示5E2重链和轻链的分子量分别为50和27 k D。【结论】本实验成功制备出一株能够稳定分泌抗异色瓢虫Vn的单克隆抗体,为建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定其动态变化奠定了基础。