运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱

编号 zgly0000483156

文献类型 期刊论文

文献题名 运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱

作者 史胜青  张守攻  李春秀  汪阳东  齐力旺 

作者单位 中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2006,4(1)

页码 79-82

年份 2006 

分类号 S513  S565.4 

关键词 梭梭(Haloxylon  Ammodendron)  置换合成法  LD-PCR法  cDNA-AFLP 

文摘内容 在植物基因克隆以及构建cDNA文库时, 都需要合成高质量的双链cDNA, 并要达到一定的数量。然而研究者经常受到试验样品量的限制。特别是比较稀少的植物材料, 例如植物的根尖、茎尖或花的雌、雄蕊等, 难以获得足够的RNA, 以致影响cDNA的合成量, 无法开展下游的实验。以PCR为基础合成第二链cD.NA的Smart技术(LD.PcR), 能够以50ng的总RNA为反转录模板合成高质量的双链cDNA。但研究者对第二链采用PCR方法是否有些基因信息丢失或丰度上发生很大的变化存有疑虑。针对以上存在的问题, 通过置换合成和长距离PCR(LD-PCR)两种方法合成3个月的梭梭幼苗茎尖双链cDNA, EcoRⅠ和Msc Ⅰ限制性内切酶双酶切后, 用16对选择性扩增引物对两种cDNA进行cDNA.AFLP的指纹图谱分析。结果表明, 置换合成和LD-PCR两种方法合成的cDNA指纹图谱中, 分别有条带约495条和470条。其中, 相同的条带共计433条, 不同的条带分别有62条和37条, 分别为各自合成方法总指纹数的12.5%和7.87%, 相同的指纹信息达87%以上。这说明两种方法合成的cDNA存在着较大的差异, 合成方法对cDNA合成质量的影响较大, 为研究人员选用何种cDNA合成方法提供了借鉴。