香蕉果实转录因子MaWRKY1基因的原核表达和多克隆抗体制备

编号 zgly0001390487

文献类型 期刊论文

文献题名 香蕉果实转录因子MaWRKY1基因的原核表达和多克隆抗体制备

作者 洪克前  邝健飞  陆旺金  陈建业 

作者单位 华南农业大学园艺学院广东省果蔬保鲜重点实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2010年12期

年份 2010 

分类号 S668.1 

关键词 香蕉  WRKY  转录因子  原核表达  多克隆抗体  耐冷性 

文摘内容 MaWRKY1是从香蕉果实中克隆出的一个转录因子基因。为进一步研究该基因的功能,制备了MaWRKY1多克隆抗体。选取MaWRKY1基因全长中N端第168~400个氨基酸之间的包括两个WRKYGQK保守域的cDNA序列,构建了原核表达载体pET-MaWRKY1,并转化到大肠杆菌BL21中诱导表达菌体蛋白。SDS-PAGE电泳检测结果表明,His-MaWRKY1融合蛋白成功获得了高效表达,分子量在26kD左右。His-MaWRKY1融合蛋白经过Ni-NTA琼脂糖凝胶树脂纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到的纯化蛋白浓度达到0.5mg·mL-1。经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清,采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化。将纯化后的抗体通过间接酶联免疫(ELISA)和蛋白质印迹(Western blot)分析,表明所制备的抗体具有很好的效价,效价比为1︰160000,同时具有良好的灵敏度和特异性。进一步提取香蕉不同组织总蛋白,Westernblot检测显示,在分子量26kD左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗体可以与香蕉WRKY蛋白特异性结合,并且低温可以诱导香蕉果实中MaWRKY1蛋白表达,暗示MaWRKY1蛋白表达可能与果实耐冷性有一定的关系。