小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达

编号 zgly0001362739

文献类型 期刊论文

文献题名 小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达

作者 田晓灵  赵永刚  包静月  王志亮  李金明  吴树清 

作者单位 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心  内蒙古农业大学 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2009年08期

年份 2009 

分类号 S852.659.5 

关键词 小反刍兽疫病毒  真核表达  重组质粒  转染 

文摘内容 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础。