一种高效提取桑树根围土壤微生物总DNA的方法

编号 zgly0000778703

文献类型 期刊论文

文献题名 一种高效提取桑树根围土壤微生物总DNA的方法

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 黄淑君  胡兴明  于翠  邓文  叶楚华 

作者单位 武汉大学生命科学学院  湖北省农业科学院经济作物研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2012,38(3)

页码 397-403

年份 2012 

分类号 S888.2 

关键词 桑树  土壤微生物  基因组DNA  纯度  多样性  PCR  变性梯度凝胶电泳 

文摘内容 为了建立桑树根围土壤微生物群落结构的分子生态学试验技术体系,采取不同的细胞裂解方法及DNA沉淀方法直接提取桑树根围土壤微生物总DNA,并以采用试剂盒提取的桑树根围土壤微生物总DNA为参照,筛选出一种能有效提取高纯度、多样性土壤微生物总DNA的方法: 以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(SDS)为裂解液,经反复冻融裂解细胞,在DNA提取液中添加聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)、牛血清蛋白(BSA)、CaCl2去除腐殖酸,并结合聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀和纯化DNA。该方法简便、快速,获得的桑树根围土壤微生物基因组DNA分子长度在23 kb以上,土壤鲜样的微生物DNA产率为11.2μg/g,且纯度较高,D(260 nm)/D(230 nm)=1.42,D(260 nm)/D(280 nm)=1.37,可直接用于PCR扩增及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。