结缕草SSR反应体系的正交优化

编号 zgly0000560845

文献类型 期刊论文

文献题名 结缕草SSR反应体系的正交优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 桂金山  王赟文  方程 

作者单位 中国农业大学草地研究所 

母体文献 草地学报 

年卷期 2008,16(1)

页码 89-93,102

年份 2008 

分类号 Q943 

关键词 结缕草  SSR标记  反应体系  正交设计  优化 

文摘内容 为了快速获得结缕草(Zoysia japonica)SSR反应体系，采用5因素(模板DNA，Mg^2＋，dNTP，Taq酶和引物)4水平正交设计筛选合适的结缕草SSR体系，并通过随机挑选3对Tm相近的引物对该优化体系进行验证。结果表明：正交设计可应用于SSR—PCR反应体系的优化，20μl最佳PCR反应体系中包括2μl 10×buffer、1．0U Taq酶、0．2mM 引物、100ng 模板 DNA、0．2mM dNTP、2．0mM Mg^＋；对结缕草进行梯度退火实验，其最佳退火温度为56～58℃；可行扩增程序是：94℃预变性4min、进行35个循环的94℃变性30S、56～58℃退火40S，72℃延伸1min；72℃延伸10min，4℃保存；该最适反应体系的建立，为今后结缕草SSR分析奠定了坚实基础。