乌药ISSR扩增条件的优化

编号 zgly0001334436

文献类型 期刊论文

文献题名 乌药ISSR扩增条件的优化

作者 顾婧婧  金则新  李钧敏  李建辉  毕泉鑫 

作者单位 西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室  台州学院生态研究所 

母体文献 西北林学院学报 

年卷期 2008年06期

年份 2008 

分类号 S567.19 

关键词 乌药  ISSR  优化  遗传多样性 

文摘内容 为了确保ISSR分析的可靠性和重复性,有必要进行ISSR-PCR反应体系的优化。以浙江省天台山乌药(Lindera aggregata)自然种群随机个体的基因组DNA为研究对象,通过对反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于乌药ISSR分析的扩增条件:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol.L-1Tris.HCl,pH 8.8,100 mmol.L-1KCl,1%Triton X-100,100 mmol.L-1(NH4)2SO4,20 mmol.L-1MgCl2),0.5U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA,10 pmol引物,0.4mmol.L-1dNTP。利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对20个乌药个体的DNA进行扩增,共得到142个位点,其中,102个为多态位点,多态位点百分率为71.83%,Nei指数为0.284 3,Shannon信息指数为0.415 3,乌药的遗传多样性处于较高水平。