苜蓿愈伤组织高频再生遗传和转化体系的建立

编号 zgly0000391684

文献类型 期刊论文

文献题名 苜蓿愈伤组织高频再生遗传和转化体系的建立

作者 金淑梅  管清杰  罗秋香  王涛  高野哲夫  柳参奎 

作者单位 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心抗性分子生物学实验室  东京大学亚洲生物资源环境研究中心  中国农业大学国家农业生物技术重点实验室 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2006,4(4)

页码 571-578

年份 2006 

分类号 S551.7 

关键词 苜蓿  GUS  愈伤组织  根癌农杆菌 

文摘内容 本研究以MS为基本培养基, 在不同浓度的2, 4-D与6-BA联合使用的诱导培养基上, 以苜蓿子叶为外植体, 诱导愈伤组织, 诱导率为55%～90.6%, 其中2mg/L2,4-D+1mg/L6-BA诱导率最高, 达90.6%; 浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS+2mg/LKT+0.15mg/L6-BA+0.3mg/LNAA分化培养基的分化率最高并且植株颜色深绿。丛生芽在1/2MS+2mg/L酵母提取物的生根培养基上再生成完整的苜蓿植株。以建立的苜蓿高频再生体系为基础, 愈伤组织为转化的受体, 用根癌农杆菌介导苜蓿, 利用GUS组织化学染色法, 研究影响遗传转化的若干因素, 获得了100株转基因植株。乙酰丁香酮的浓度为100μol/L, 菌液浓度OD600为0.3-0.5, 最佳的侵染时间为15min, 共培养时间为4d, 卡那霉素浓度为50mg/L时转化频率最合适。最高转化频率可达80%, Kalla抗性植株Northernblotting检测表明, 目的基因已整合进苜蓿基因组中。建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系, 为获得其它基因转化苜蓿, 奠定基础。