无乳链球菌表面蛋白Rib基因克隆与重组表达

编号 zgly0001423103

文献类型 期刊论文

文献题名 无乳链球菌表面蛋白Rib基因克隆与重组表达

作者 张荣  杜欣军  徐桂香  王菲  王硕 

作者单位 食品营养与安全省部共建教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2012年03期

年份 2012 

分类号 S852.611 

关键词 无乳链球菌  表面蛋白  Rib基因  克隆与表达 

文摘内容 无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的常见病原微生物之一,其表面蛋白作为一种高免疫原性的生物大分子,具有较高的种内特异性,是理想的候选疫苗与免疫检测靶标。本研究通过对无乳链球菌高免疫原性表面蛋白Rib的重组表达与抗体制备,为后期无乳链球菌的疫苗研制与检测奠定了良好的基础。首先提取了无乳链球菌基因组DNA,从中成功扩增出长度为452bp的编码表面蛋白Rib N端的基因片段。将这一片段连入重组表达载体pET-26b,转化受体菌株BL21(DE3)后利用IPTG进行诱导,结果表达了分子质量约为18ku的外源蛋白。在低温表达条件下,对IPTG诱导浓度进行优化,结果表明,IPTG的最适诱导浓度为0.05mmol/L。将诱导后的菌体进行超声波破碎并进行SDS-PAGE检测,结果显示重组蛋白以包涵体形式存在,对其进行变性、复性处理,利用亲和凝胶纯化后获得了纯度较高的重组蛋白。将重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,经检测抗体效价达到1∶480 000。