人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达

编号 zgly0000823614

文献类型 期刊论文

文献题名 人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达

作者 杨海  王芳宇  李青旺  胡建宏  董潇潇 

作者单位 衡阳师范学院生命科学系  西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(10)

页码 32-36

年份 2013 

分类号 Q786 

关键词 反向PCR  人抗凝血酶  Cys248  定点突变  真核表达 

文摘内容 【目的】:建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法, 为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】:以人AT cDNA序列为模板, 设计1对反向扩增引物, 进行反向PCR反应; PCR产物经连接、测序后, 克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上, 构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mAT-GFP; 用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达, 收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】:突变基因经测序证实与预期结果一致, 且在GME细胞内得到高效表达, 细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3) mg/L。【结论】:反向PCR法是对-AT基因进行定点突变的可靠方法, AT-突变基因在GME细胞内可高效表达。