荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析

编号 zgly0000520925

文献类型 期刊论文

文献题名 荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析

作者 刘双龙  王长法  杨宏军  杨少华  阿合买提·买买提  高运东  仲跻峰 

作者单位 山东省农业科学院奶牛研究中心  新疆农业大学动物医学学院 

母体文献 动物学杂志 

年卷期 2007,42(5)

页码 101-105

年份 2007 

分类号 Q953 

关键词 β-防御素  克隆  牛 

文摘内容 为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物。收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA。经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109。在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基。用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同。结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础。