华北大黑鳃金龟两种围食膜蛋白cDNA的分子克隆与序列分析

编号 zgly0001371036

文献类型 期刊论文

文献题名 华北大黑鳃金龟两种围食膜蛋白cDNA的分子克隆与序列分析

作者 周洪旭  谭秀梅  李长友  王俊平  孙绪艮  郭巍  李国勋 

作者单位 山东农业大学植物保护学院  青岛农业大学植物保护学院  河北农业大学河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2009年01期

年份 2009 

分类号 S433 

关键词 华北大黑鳃金龟  中肠  cDNA表达文库  围食膜蛋白  序列分析 

文摘内容 6本文以华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠为材料,依据Stratagene公司文库构建试剂盒方法,构建其中肠cDNA表达文库,该文库滴度为1.9×106pfu/mL,重组率为99.97%。依据现代免疫学原理,利用棉铃虫Helicoverpaarmigera围食膜蛋白多克隆抗体筛选文库,得到两个编码华北大黑鳃金龟围食膜蛋白的cDNA克隆Ho-Peritrophin1与Ho-Peritrophin2,其cDNA长分别为2385bp和1633bp,在polyA末端上游各有3个多聚腺苷酸信号序列AATAAA,最长开放阅读框(ORF)分别编码729个和477个氨基酸,与粉纹夜蛾Trichoplusia niCBP2(chitin bindingprotein2)的相似性最高,分别为21.9%和19.1%。结构域分析表明,Ho-Peritrophin1与Ho-Peritrophin2分别具有9个和6个几丁质结合功能域,只含有较少的O-糖基化位点,不含有类粘蛋白结构域。胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对两种蛋白的作用位点主要位于几丁质结合功能域(chitin binding domain,CBD)内部,而因受几丁质结合功能域保护,这两种蛋白能够抵抗这些蛋白酶的降解。与正常CBD比较,这两种蛋白C端的CBD只含有4个Cys,只在第1与第3、第4与第5个Cys之间形成两对二硫键,缺少由第2与第6个Cys形成的二硫键。推测其N端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。